Čistenie monoklonálnych protilátok

Zhrnutie

Imunoglobulín zo séra myši nesúcej ascit, ktorý sa dostal do ascitu nádoru, môže simulovať reaktivitu mAb s antigénom, proti ktorému bola myš predtým prirodzene imunizovaná. V praxi to má osobitný význam, keď je mAb prítomná v ascitickej tekutine v nízkej koncentrácii alebo má iba nízku afinitu k svojmu antigénu, a preto ju nemožno použiť vo vysokých zriedeniach. V týchto prípadoch sa ako kontrola môže použiť vzorka séra z myši, ktorá sa získala pred injekciou hybridómových buniek.

V prípade priameho značenia (napr. Biotínom, peroxidázou alebo fluórchrómom) nedostatočne čistého prípravku mAb môžu byť označené aj iné proteíny (napr. Inzulín alebo transferín atď.). Ak sa protilátka teraz používa, napríklad na vyšetrenie buniek na expresiu antigénu, ktorý je rozpoznávaný monoklonálnou protilátkou, môžu sa označiť aj bunky, ktoré majú receptory pre kontaminujúci proteín (napr. Receptory transferínu).

Zvláštne ťažkosti vznikajú pri použití prípravy mAb v biologických testovacích systémoch. Očakávaná aktivita protilátky môže byť zmenená kontamináciou imunitných mediátorov. Pretože mnohé z týchto imunitných mediátorov ešte nie sú dostatočne dobre definované, nemožno vylúčiť, že sú v prípravku stále prítomné aj po dôkladnom vyčistení protilátky. V takýchto prípadoch môže slúžiť ako kontrolná protilátka protilátka rovnakej podtriedy imunoglobulínov, ktorá nereaguje s príslušným antigénom, ale pochádza z rovnakej fúzie a bola pripravená a purifikovaná za rovnakých podmienok.